martes, 13 de abril de 2010

AMPLIFICACIÓN POR PCR Y SECUENCIACIÓN DIRECTA DE ADN EN ESPECIMENES A PARTIR DE ETANOL PARA CONSERVACIÓN

Shadi, Gregory y Mehrdad proponen una nueva técnica para la amplificación del ADN de especimenes preservados en etanol, se trata de utilizar una porción del etanol de conservación que contiene la muestra y utilizarlo como material genético para amplificarlo por PCR. Shadi y copartícipes hypotetizan que una pequeña cantidad de ADN se suspende en el etanol al momento de preservar las muestras de especimenes, esa pequeña cantidad de ADN se puede utilizar para su póstuma amplificación por un protocolo estándar de PCR, demostrando así que el proceso de extracción de ADN no es necesario permitiendo realizar análisis no invasivos y analizar muestras de tejidos ya agotados.

Para llegar a esta conclusión, realizaron estudios con muestras de plantas e insectos de museo y muestras colectadas recientemente ambas preservadas en etanol al 95 %. Uno de los ensayos de este artículo que resulta muy atractivo, es que lograron amplificar fragmentos de ADN de 130 y 658 pares de bases del Citocromo C oxidasa 1 (CO1) de la larva de la mariposa Hypopta agavis, larva que es usada en la bebida alcohólica mezcal siendo una muestra de éste el utilizado como material genético para amplificación.

Shadi comparó las diferencias de los resultados entre un protocolo tradicional de extracción de ADN y la técnica de amplificación directa para la muestra de la larva y demuestran que los amplicones son muy similares con una pequeña diferencia de concentración de ADN, las secuencias las compararon en las librerías existentes de Lepidoptera DNA barcodes at BOLD y confirmaron que pertenece a la familia de la mariposa agave.

El artículo y su respectivo complemento se encuentran en la dirección electrónica http://www.biotechniques.com/BiotechniquesJournal/2010/March/Direct-PCR-amplification-and-sequencing-of-specimens-DNA-from-preservative-ethanol/biotechniques-187463.html de la revista BioTechniques del volumen 48 tercera publicación